中藥提取技術(shù)處理黃芪多糖的分離純化

中藥提取技術(shù)處理黃芪多糖的分離純化

????多糖的結(jié)構(gòu)與蛋白質(zhì)和核酸相似，都可分為一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)和四級(jí)結(jié)構(gòu)。一級(jí)結(jié)構(gòu)包括糖基組成、排列順序、糖鏈有無分支、分支的位置和長短等。多糖骨架間以氫鍵結(jié)合所形成的各種聚合物就是其二級(jí)結(jié)構(gòu)，除此以外還有三級(jí)和四級(jí)結(jié)構(gòu)的存在，這說明多糖的結(jié)構(gòu)非常復(fù)雜，對(duì)其進(jìn)行分離純化得到均一組分的多糖，需要多種方法的結(jié)合。

????多糖是動(dòng)、植物體內(nèi)重要的生物活性物質(zhì)，可以說所有動(dòng)植物均有多糖。越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，多糖對(duì)人體具有極大的利用價(jià)值，許多中藥如人參、黃芪、當(dāng)歸、五味子、夏枯草、蘆根、靈芝等，還有許多營養(yǎng)價(jià)值較高的食用菌如香菇、猴頭菇、金針菇等。多糖純化方法很多，多糖的性質(zhì)是其分離純化的基礎(chǔ)[76」，簡(jiǎn)單介紹以下幾種常用的方法。中藥提取技術(shù)處理黃芪多糖的分離純化

????1.分級(jí)沉淀法

????利用不同多糖分子大小和溶解度不同而分離，常用的有季錢鹽沉淀法和有機(jī)溶劑沉淀法。如安絡(luò)小皮傘粗多糖的純化方法，在多糖溶液中加入不同濃度乙醇溶液，得到多個(gè)多糖;天門冬冷水浸提物采用丙酮分級(jí)沉淀法得到3種多糖;鐵皮石解多糖采用的就是漠化十六烷基三甲胺(CTAB)絡(luò)合精制而得。

????2.凝膠柱層析法

????常用的凝膠有葡聚糖凝膠(Sephadex)和瓊脂糖凝膠(Sepharose)，以不同濃度的鹽溶液和緩沖溶液作為洗脫劑，從而使不同大小的多糖分子得到分離純化，但不適宜粘多糖的分離。一般生藥提取物得以分離多用Sepharose, DEAEToyopearl, Sephacryl, ?Sephadex精致得到各種多糖。如靈芝多糖、附子多糖、白術(shù)多糖、山藥多糖等。

????3.纖維素陰離子交換劑柱層析法

????常用的交換劑為DEAE一纖維素和ECTEOLA一纖維素，分類硼砂型和堿型兩種，洗脫劑可用不同濃度堿溶液、硼砂溶液、鹽溶液，其優(yōu)點(diǎn)可吸附雜質(zhì)、純化多糖，并適用于分離各種酸性、中型多糖和粘多糖。如百合多糖、北沙參多糖、太子參多糖等。中藥提取技術(shù)處理黃芪多糖的分離純化

????4.其他方法

透析、超濾及超速離心選用不同規(guī)格的超濾膜和透析袋進(jìn)行超濾和透析以及一定條件下的超速離心操作，可按分子大小將多糖樣品分級(jí)，超濾和透析更常用于除去小分子物質(zhì)。區(qū)帶電泳主要按多糖的電荷性質(zhì)不同分級(jí)，常用的有聚丙烯酞胺凝膠電泳、乙酸纖維素薄膜電泳。

5.1黃芪多糖的提取與純化

????黃芪多糖是黃芪中的重要有效成分，為葡萄糖與阿拉伯糖的多聚體，分子量在兩萬以下。它的主要功效在于提高機(jī)體的免疫力，包括體液免疫、細(xì)胞免疫、機(jī)體非特異性免疫等。它能使動(dòng)物的脾臟增大，脾內(nèi)漿細(xì)胞增生，促進(jìn)抗體合成，且能對(duì)抗強(qiáng)的松等免疫抑制劑的影響。中藥提取技術(shù)處理黃芪多糖的分離純化

查閱相關(guān)資料，黃芪多糖的分離純化多采用水提醇沉，本實(shí)驗(yàn)采用此法得黃芪多糖粗品。醇沉法是目前應(yīng)用最為廣泛的一種精制方法，其原理是中藥有效成分既溶于水又溶于醇，而水提取液中常含有粘液質(zhì)、糊化淀粉、果膠、樹膠、蛋白質(zhì)等，用適當(dāng)濃度的乙醇可以有效地沉淀除去。如藥液中含醇量達(dá)60%可除去淀粉，含醇量達(dá)70%時(shí)，除蹂質(zhì)、水溶性色素等少數(shù)無效成分外，大部分雜質(zhì)均可沉淀除去。由于這種方法操作簡(jiǎn)單，技術(shù)與設(shè)備要求不高，故自七十年代初一直沿用至今，成為目前“法定”的精制方法。

5.2黃芪多糖的純化

????根據(jù)黃芪多糖難溶于濃乙醇的性質(zhì)，可以采用沉淀法對(duì)提取液進(jìn)行純化。具體制備流程如圖5-1，在濃縮和離心分離后的提取液，加入無水乙醇，加入量按達(dá)到乙醇濃度為70%(vol%)就可以了。沉淀液靜置24h以上，然后進(jìn)行離心分離和過濾，沉淀用無水乙醇和丙酮進(jìn)行多次洗滌，干燥得到黃芪多糖粗品。中藥提取技術(shù)處理黃芪多糖的分離純化

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????本文針對(duì)黃芪多糖的提取和純化進(jìn)行了研究，發(fā)現(xiàn)用高壓提取技術(shù)，黃芪多糖的后續(xù)分離雜質(zhì)少，更容易分離純化，取得比較滿意的效果，但這只是初步的，我們得到的是多糖粗品，要得純品需進(jìn)一步進(jìn)行純化，如需除脂、除蛋白、除色素和低聚糖等小分子雜質(zhì)等操作。中藥提取技術(shù)處理黃芪多糖的分離純化

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